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恒温消解仪在蛋白质测定中的有效应用
点击次数：2165 更新时间：2014-12-16 返回
凯氏定氮法测定蛋白质的含量，是zui常用的蛋白质测定方法，但样品的消解费事费时，一般一台电炉一天zui多消化两个样品。这里，我们采用恒温消解仪进行蛋白质消解，4~6小时可同时消化16个样品。有效的提高了样品消解的速度。
下面具体来看恒温消解仪进行蛋白质消解的过程：
A.称0.2-2.0g固体样品或5-10g液体样品于平底玻璃消化管中，加0.2g硫酸铜，3g硫酸钾及20ml硫酸，稍摇匀后于管口放一小漏斗，置于恒温消解仪中，300℃左右，小心加热，一般2h内，管内容物可全部炭化，泡沫*停止。
B.将温度降至240℃左右，分几次向管内共加10ml过氧化氢，提高温度至390℃左右，继续消化，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热30min，放冷后，定容100ml，混匀备用。
C.取与处理样品相同的硫酸铜、硫酸钾、硫酸、过氧化氢按同一方法做试剂空白实验。
本方法全部消化过程约需4-6h，一次zui多可消化16个样品。同时使用普通电炉进行蛋白质消解，进行比较实验。
定氮测定：按国家标准[1]中GB5009.5-85食品中蛋白质的测定方法(4.3)微量定氮法进行操作。
结果及讨论
样品的用量：根据不同的蛋白质含量，取0.2g-2.0g样品，置消化管内进行消解，在300℃初始消解无外溢现象。样品先加酸放置过夜，可加快消解速度。
开始消解时，由于消解温度恒定，消解管整体受热均匀，一般泡沫不能溢出管外，较直接电炉消解容易控制。
消解温度：初始消解时温度不可过低，过低造成消化时间延长。实验证明初始消解温度300℃为宜。只要消解管内无泡沫产生，应及时把温度提高到390℃左右，以加快消解速度。
恒温消解仪在蛋白质测定中，有效提高了样品消解的速度，进而也提高了蛋白质测定的速度。
